手機版
菌落計數方法包括平皿法、薄膜過濾法和最可能數法（Most-Probable-Number Method，簡稱MPN法），其中平皿法可分為傾注平皿法和涂布平皿法，常見的菌落總數操作方法見表1。
|
測試標準 |
適用范圍 |
操作方法 |
|
GB4789.2-2022 《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數測定》 |
食品 |
傾注平皿法/菌落總數測試片 |
|
FDA- Bacteriological Analytical Manual Chapter 3：2001《Aerobic Plate Count》 |
食品 |
傾注平皿法/螺旋板法 |
|
GB/T13093-2006 《飼料中細菌總數的測定》 |
飼料 |
傾注平皿法 |
|
GB/T18204.9-2000 《游泳池水微生物檢驗方法 細菌總數測定》 |
游泳池水 |
傾注平皿法 |
|
GB/T5750.12—2023《生化飲用水標準檢驗方法 微生物指標》 |
飲用水/水源水 |
傾注平皿法/酶底物法 |
|
WS 394-2012 《公共場所集中空調通風系統衛生規范 附錄D 集中空調送風中細菌總數檢驗方法》 |
環境 |
六級篩孔撞擊式微生物采樣器 |
|
GB15979-2002 《一次性使用衛生用品衛生標準 附錄B2》 |
一次性衛生用品 |
傾注平皿法 |
|
《化妝品安全技術規范》2015版 |
化妝品 |
傾注平皿法 |
|
BS EN ISO 21149 (2017) 《Cosmetics- Microbiology -Enumeration and detection of aerobic mesophilic bacteria》 |
化妝品 |
平皿法/膜過濾法 |
|
USP-NF 61 《MICROBIOLOGICAL EXAMINATION OF NONSTERILE PRODUCTS: MICROBIAL ENUMERATION TESTS》 |
藥品 |
平皿法/薄膜過濾法/MPN法 |
|
BP Appendix XVI B 《Microbiological Examination of Non-sterile Products》 |
||
|
EP 9.0 edition, Chapter 2.6.12《Microbiological examination of non-sterile products: microbial enumeration tests》 |
||
|
ChP1105 2020版《非無菌產品微生物限度檢查：微生物限度計數》 |
根據上表的適用范圍和操作方法可得出，平皿法是使用范圍最廣。
根據測試標準適用范圍和樣品特性：
A.平皿法因可操作性性強，會更多用于污染度高的被檢樣品；
B.薄膜過濾法適用于測試量需求大且污染度一般的液體樣品；
C.MPN法可用于微生物計數時精確度較差時，包括對于某些微生物污染度很小的樣品。
故在日常測試中，可根據樣品的污染度情況去選擇更合適的菌落總數測試操作方法。
樣品的取樣量與其質量標準或測試方法去選擇，對于官方標準未明確取樣量的，亦可根據結果的代表性加大取樣量。稀釋緩沖液的選擇則是要求樣品在稀釋緩沖液中能夠充分混合，從而保證樣品的均一性，故不同樣品，會有不同的稀釋液需求。日常工作中，常見的稀釋緩沖液與要求見表2。
|
測試標準 |
樣品量 |
稀釋液 |
備注 |
|
GB4789.2-2022 《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數測定》 |
25g/mL |
無菌生理鹽水/磷酸鹽緩沖液 |
|
|
FDA- Bacteriological Analytical Manual Chapter 3：2001《Aerobic Plate Count》 |
50g/mL |
磷酸鹽緩沖液/無菌水 |
|
|
GB/T13093-2006 《飼料中細菌總數的測定》 |
25g/10g |
0.85%生理鹽水/磷酸鹽緩沖液 |
|
|
GB/T18204.9-2000 《游泳池水微生物檢驗方法 細菌總數測定》 |
原液 |
無菌生理鹽水 |
|
|
GB/T5750.12—2023《生化飲用水標準檢驗方法 微生物指標》 |
原液 |
無菌生理鹽水 |
|
|
WS 394-2012 《公共場所集中空調通風系統衛生規范 附錄D 集中空調送風中細菌總數檢驗方法》 |
28.3L/min，（5-15）min |
不適用 |
|
|
GB15979-2002 《一次性使用衛生用品衛生標準 附錄B2》 |
10±1g |
無菌生理鹽水（200mL） |
不進行梯度稀釋，做5平行 |
|
《化妝品安全技術規范》2015版 |
10g/mL |
無菌生理鹽水 |
無法充分溶解稀釋液中的樣品可加吐溫80和/或石蠟 |
|
BS EN ISO 21149 (2017) 《Cosmetics- Microbiology -Enumeration and detection of aerobic mesophilic bacteria》 |
1:10（樣品：加稀釋液后） |
無菌生理鹽水、磷酸鹽緩沖液、pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液等
|
最終的取樣量與稀釋液，需通過樣品方法學適用性驗證方能使用。 |
|
USP-NF 61 《MICROBIOLOGICAL EXAMINATION OF NONSTERILE PRODUCTS:MICROBIAL ENUMERATION TESTS》 |
|||
|
BP Appendix XVI B 《Microbiological Examination of Non-sterile Products》 |
|||
|
EP 9.0 edition, Chapter 2.6.12《Microbiological examination of non-sterile products: microbial enumeration tests》 |
|||
|
ChP1105 2020版《非無菌產品微生物限度檢查：微生物限度計數》 |
菌落總數的培養條件會因不同的樣品類型或制定機構而有所差異，其差異包括培養基、培養溫度和培養時間的選擇。菌落總數常見的培養條件見表3。
|
測試標準 |
培養基 |
培養溫度 |
培養時間 |
|
GB4789.2-2022 《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數測定》 |
平板計數瓊脂（PCA） |
36±1℃（水產品30±1℃） |
48±2h（水產品72±3h） |
|
FDA-Bacteriological Analytical Manual Chapter 3：2001《Aerobic Plate Count》 |
35±1℃（牛奶32±1℃） |
48±2h |
|
|
GB/T13093-2006 《飼料中細菌總數的測定》 |
營養瓊脂（NA） |
30±1℃ |
72±3h |
|
GB/T18204.9-2000 《游泳池水微生物檢驗方法 細菌總數測定》 |
36±1℃ |
48h |
|
|
GB/T5750.12—2023《生化飲用水標準檢驗方法 微生物指標》 |
36±1℃ |
48±2h |
|
|
WS 394-2012 《公共場所集中空調通風系統衛生規范 附錄D 集中空調送風中細菌總數檢驗方法》 |
35~37℃ |
48h |
|
|
GB15979-2002 《一次性使用衛生用品衛生標準 附錄B2》 |
35±2℃ |
48h后 |
|
|
《化妝品安全技術規范》2015版 |
卵磷脂、吐溫80-營養瓊脂 （LTNA） |
36±1℃ |
48±2h |
|
BS EN ISO 21149 (2017) 《Cosmetics- Microbiology -Enumeration and detection of aerobic mesophilic bacteria》 |
胰酪大豆胨瓊脂培養基（TSA） |
32.5±2.5oC
|
72±6h |
|
USP-NF 61 《MICROBIOLOGICAL EXAMINATION OF NONSTERILE PRODUCTS: MICROBIAL ENUMERATION TESTS》 |
3~5天 |
||
|
BP Appendix XVI B 《Microbiological Examination of Non-sterile Products》 |
|||
|
EP 9.0 edition, Chapter 2.6.12《Microbiological examination of non-sterile products: microbial enumeration tests》 |
|||
|
ChP1105 2020版《非無菌產品微生物限度檢查：微生物限度計數》 |
菌落總數在進行計數時，肉眼觀察，必要時用放大鏡或菌落計數器，記錄稀釋倍數和相應的菌落數量。菌落計數以菌落形成單位（CFU/cfu，Colony Forming Units）進行報告。在計數時，首先需明確計數范圍是否符合要求，從而保證測試結果的準確性和可靠性，不同的測試方法在首選計數范圍會有一定差異，以及顯色劑在觀察中的應用也有一定的要求。詳情見表4。
|
測試標準 |
培養基中是否可加顯色劑1 |
首選計數范圍 |
最終結果報告 |
|
GB4789.2-2022 《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數測定》 |
是 |
30~300cfu |
100cfu以內報整數，超過100cfu兩位有效數字，＞300cfu的則報告TNTC2，采用“四舍五入”。 |
|
FDA-Bacteriological Analytical Manual Chapter 3：2001《Aerobic Plate Count》 |
否 |
25~250cfu |
＜25cfu則報告＜25或實際值，＞250cfu則報告＞250或TNTC2。 |
|
GB/T13093-2006 《飼料中細菌總數的測定》 |
否 |
30~300cfu |
100cfu以內報整數，超過100cfu兩位有效數字，＞300cfu的則報告TNTC2。采用“四舍五入”。 |
|
GB/T18204.9-2000 《游泳池水微生物檢驗方法 細菌總數測定》 |
否 |
30~300cfu |
100cfu以內報整數，超過100cfu兩位有效數字，＞300cfu的則報告TNTC2。采用“四舍五入”。 |
|
GB/T5750.12—2023《生化飲用水標準檢驗方法 微生物指標》 |
否 |
30~300cfu |
100cfu以內報整數，超過100cfu兩位有效數字，＞300cfu的則報告TNTC2。采用“四舍五入”。 |
|
WS 394-2012 《公共場所集中空調通風系統衛生規范 附錄D 集中空調送風中細菌總數檢驗方法》 |
否 |
無 |
報告cfu/m3 |
|
GB15979-2002 《一次性使用衛生用品衛生標準 附錄B2》 |
否 |
無 |
全部無生長報＜4cfu/g（mL），若生長，報100cfu以內報整數，超過100cfu兩位有效數字。 |
|
《化妝品安全技術規范》2015版 |
是 |
30~300cfu |
100cfu以內報整數，超過100cfu兩位有效數字，＞300cfu的則報告TNTC2。采用“四舍五入”。 |
|
BS EN ISO 21149 (2017) 《Cosmetics- Microbiology -Enumeration and detection of aerobic mesophilic bacteria》 |
否 |
平皿法：30~300cfu；薄膜過濾法：15~150cfu。 |
100cfu以內報整數，超過100cfu兩位有效數字。 |
|
USP-NF 61 《MICROBIOLOGICAL EXAMINATION OF NONSTERILE PRODUCTS: MICROBIAL ENUMERATION TESTS》 |
否 |
平皿法：不超過250cfu；薄膜過濾法：記錄結果。 |
取兩位有效數字報告 |
|
BP Appendix XVI B 《Microbiological Examination of Non-sterile Products》 |
|||
|
EP 9.0 edition, Chapter 2.6.12《Microbiological examination of non-sterile products: microbial enumeration tests》 |
|||
|
ChP1105 2020版《非無菌產品微生物限度檢查：微生物限度計數》 |
否 |
平皿法：不超過300cfu；薄膜過濾法：不超過100cfu |
取兩位有效數字報告 |
|
注： 1. 顯色劑一般為TTC，TTC全稱為0.5%氯化三苯四氮唑。加此顯示劑后，多數菌落顯示紅色。 2. TNTC全稱為多不可數，即Too Number To Count。 |
|||
菌落總數的測定，不同樣品有不同的特性，故在進行此方面衛生學測試時，結合行業需求，以及樣品的生產工藝、消費對象、使用方式等需求，選擇合適的測試操作流程，同時保證在報告結果時，亦需根據市場所選用的方法進行報告結果。
綜合以上，衛生學的菌落測試在實驗操作中雖然有差異，但總體的差異性不大，比如培養基都是非選擇性生長培養基，培養溫度基本在35℃左右，培養時間則溫度越高，時間則可減少。故保證菌落總數測試結果的準確性與可靠性時，根據實際需求，通過調節測試方法的取樣、稀釋液、培養條件等來建立更符合本實驗室的菌落總數測試方法。
想了解更多資訊，歡迎關注“食品微生物檢測”公眾號；
添加微信13371394813申請加入微生物檢驗技術交流群！
