培養基經高壓滅菌后，用經過滅菌的工具（如接種針和吸管等）在無菌條件下接種含菌材料（如樣品、菌苔或菌懸液等）于培養基上，這個過程叫做無菌接種操作。
在實驗室檢驗中的各種接種必須是無菌操作。

2. 接種針冷卻

接種針滅菌后，移到酒精燈旁邊冷卻，備用。

配制好固體或液體培養基后，利用高壓蒸汽滅菌鍋進行滅菌，經過滅菌后培養基里無任何微生物，在超過經工作臺內，用接種針等將目標菌種接種到培養基中的過程。

劃線分離：

由接種環沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續劃線，微生物細胞數量將隨著劃線次數的增加而減少，并逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經培養后，可在平板表面得到單菌落。

①取菌種：取出目標菌種，融化后，備用；

②接種針滅菌：灼燒接種針進行滅菌；

③接種針冷卻：將接種針移至酒精燈旁邊冷卻；

④蘸取菌種：甘油管用75%酒精消毒，待酒精揮發完全，在酒精燈火焰略微滅菌（防止烤糊），然后用接種環蘸取一環菌種；

⑤劃線：取已經備好的固體平板，邊轉動平板邊用酒精燈火焰滅菌，打開平板（靠口朝酒精燈），用上述接種環在平板上劃線，先在一側連續劃線3-4次，邊轉動平板邊用酒精燈灼燒接種環，冷卻后，用接種環穿過第一次劃線部分繼續劃線3-4次，同樣方法進行第三次劃線，或第四次劃線（根據菌液濃度和菌種類型確定劃線次數），灼燒接種環；

⑥標記：在平板底部邊緣處標記菌種名稱，日期和其他信息；

四、微生物檢驗過程中的注意事項

（1）在操作中不應有大幅度或快速的動作；
（2）使用玻璃器皿應輕取輕放；
（3）在正火焰上方操作；
（4）接種用具在使用前、后都必須灼燒滅菌；
（5）在接種培養物時，協作應輕、準；
（6）不能用嘴直接吸吹吸管；
（7）帶有菌液的吸管、玻片等器材應及時置于盛有5%來蘇爾溶液的消毒桶內消毒。