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    倒平板技巧分享

    放大字體  縮小字體 發布日期:2024-09-05
    核心提示: 倒平板在生物實驗中是一個至關重要的環節,廣泛應用于細菌培養、分子生物學實驗的日常操作中。
     倒平板

    倒平板在生物實驗中是一個至關重要的環節,廣泛應用于細菌培養、分子生物學實驗的日常操作中。無論是在環境監測、水質監測,還是微生物檢查中,準確有效地倒平板都是獲得實驗成功的前提。然而,初學者往往在這一過程中面臨諸多挑戰。為此,本文將總結幾點小技巧,以幫助初學者提升倒平板供大家參考:

     

     

    一、培養基溫度確定:
    1.標準要求:熔化后的培養基放入47 ℃~50 ℃的恒溫裝置中冷卻保溫(可根據實際培養基凝固溫度適當提高恒溫裝置溫度),直至使用,培養基達到47 ℃~50℃的時間與培養基的品種、體積和數量有關。(GB 4789.28-2024)
    2.固體培養基傾注的溫度在45℃-50℃,怎么確定?
    技巧:用手心輕輕碰一下盛固體培養基的三角瓶,感覺不燙,然后用手背也感覺一下,感覺燙手,這時的溫度大概是50℃。(口訣:手心不燙手背燙)。
    3.為什么要確定培養基溫度?
    溫度過高,培養基凝固時間過長,培養皿皿蓋上會出現大量冷凝水,不利于后續實驗。對于需要添加不耐熱的抗生素等試劑的培養基,溫度過高,試劑容易失效。

     


    二、防止培養皿中有冷凝水:


    1、待固體培養基降低溫度至45℃-50℃,開始倒平板,此時水蒸氣蒸發速度減慢,皿蓋產生的水就少。

    2、即使溫度至45℃-50℃,培養皿蓋還是有水蒸氣、還是會有水珠,怎么辦?倒平板的時候把皿蓋打開,待全部倒完后,超凈臺里凝固5min后,關閉皿蓋,倒置放置,備用。(不嚴謹)

    3、在倒培養基時,可以一個壘一個,靜置直到全部培養皿凝固,倒置備用。這種方法,除了最上面的皿蓋有水蒸氣,其余皿蓋都不會有水蒸氣產生。(專家不建議這樣操作)


    三、預防培養基氣泡形成


    (1)滅菌之前,瓊脂粉要充分溶解。

    (2)滅菌后待溫度降至50-60℃,輕輕沿壁搖勻,讓培養基整體沿著同一個方向搖起來,直到搖勻為止。

    (3)滅菌之后,需要添加抗生素等試劑的培養基待溫度降至45-50℃,再加入抗生素等試劑,輕輕沿壁搖勻,讓培養基整體沿著同一個方向搖起來,直到搖勻為止。

    (4)已經產生好多氣泡,又消不掉的培養基,用微波爐等加熱設備重新加熱一下,溫度高了氣泡也就從培養基中跑出來啦。

    四、倒平皿保持均一性:
    傾注平皿要左三圈,右三圈的晃動,注意不要把平皿蓋沾上,并且要輕輕晃動。

    五、具體對待:
    前面幾點講了倒平皿的最適溫度保持在45-50度,但不同品牌的瓊脂質量不一樣,同樣按照國標中的配方瓊脂含量1.5%, 有些瓊脂凝固很快,有些凝固慢一些,還有環境溫度偏低,瓊脂凝固也會快一些,要根據實際情況,適當調整瓊脂的含量,在室溫較低時我們所配的培養基瓊脂 用量就偏少一些,還有在倒平板和混勻時動作要快一些,室溫實在太低,也可以把培養皿放到烘箱中適當加熱一下(40度左右)。


    六、培養基厚度:
    1.傾注熔化的培養基至平皿中(直徑90 mm的平皿﹐通常要加入15 mL ~20 ml.瓊脂培養基),使之在平皿中的厚度至少為3 mm。如果平板需貯存,或者培養時間超過48 h或培養溫度高于40 ℃,則需要傾注更多的培養基(GB4789.28-2024)。

    但是具體操作如何把握,這是個難題?

    技巧:倒平板的時候,鋪滿整個培養皿底部,稍微再倒一點點就是20mL,再稍微多倒一點點就是25mL,這個需要經驗,多倒幾次就能把握。

     微信圖片_20240905103028

    編輯:songjiajie2010

     
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