一、微生物檢測意識

樹立正確的無菌觀念和檢測人員的素質，是每一個微生物檢測人員應具備的素質，好的修養素質和積極的工作態度是保證結果準確的基礎，下面的規定規范都是為檢測服務的，如果檢測人員沒有好的素質，這些規定都是虛設，擺設；希望下面的規范是每位檢測人員想要做得，而不是強加在自己身上的緊箍咒。

 

①增強自己得生物安全意識，如何保護自己，如何保護樣品，如何無菌操作，有責任心。

 

②實驗原理，實驗原理是實驗的精髓，掌握它，就能夠對整個實驗更好的了解深入，學習研究。

 

③實驗條件的把握，對實驗的每個條件是否掌握清楚，實驗的關鍵控制點是否清楚。

 

④實驗結果的把握，一個實驗結果的出現，首先應該自我分析，并且具備這種分析能力，對異常如何處理或是進一步驗證。

 

⑤具備研究好學心態，檢測工作是一個相對只是含量較高的職業，高科技飛速發展的今天，許多當時的先進技術不久就陳舊落后，檢測工作也一樣，優秀的化驗員總是虛心好學，善于研究，總是處在科技的前沿。

 

⑥人員素質，積極向上，樂于助人，對工作負責，工作第一等，努力提高自己的工作質量。

 

 

二、微生物檢測

1.實驗前的準備

1.1無菌間

無菌間是微生物實驗的重要環節，關系到實驗結果的準確性，無菌間的使用規范要嚴格要求，保證實驗環境影響因素降到最低。

 

使用要求：

1、無菌間在使用前，必須先進行清理、臭氧殺菌時間50min或紫外燈殺菌30min。

 

2、檢測使用的器皿、樣品等物品的進出，通過緩沖窗進行傳遞，使用完畢后紫外燈殺菌30min，開傳遞窗時禁止兩邊同時打開。

 

3、檢測人員進入緩沖間后，先更換拖鞋、佩帶無菌帽和一次性口罩，更換衣服，并將其擺放整齊，方可進入無菌間。

 

4、進入無菌室過程中，依次打開和關閉各緩沖間的門，以避免空氣流通帶入外界的雜菌。

 

5、無菌操作前必須使用75%酒精對手部進行消毒，接種有害菌種時必須戴手套。

 

6、進行接種所用的吸管，平皿及培養基等必須經嚴格消毒滅菌，打開包裝未使用完的器皿，不能放置后再使用，金屬用具應高壓滅菌或用95%酒精點燃燒灼后使用，剪刀、鑷子至少每周進行一次高壓滅菌。

 

7、從包裝中取出吸管時，吸管尖部不能觸及外露部位，使用吸管接種于試管或平皿時，吸管尖不得觸及試管或平皿邊。

 

8、接種樣品、轉種細菌必須在酒精燈前操作，接種細菌或樣品時，吸管從包裝中取出后及打開試管塞都要通過火焰消毒。

 

9、接種環或針在接種細菌前應經火焰燒灼全部金屬絲，必要時還要燒到環和針與桿的連接處，接種結核菌和烈性菌的接種環應在沸水中煮沸5min，再經火焰燒灼。

 

10、吸管吸取菌液或樣品時，應用相應的橡皮頭吸取，不得直接用口吸。

 

11、檢驗結束后，所有帶菌的培養基、試劑、稀釋液和器皿必須盡快清理出無菌間滅菌洗刷。

 

12、檢驗結束后，人員離開無菌間前，須將無菌間的衛生徹底清理、并用紫外燈進行殺菌。

 

13、無菌間所用工器具（剪刀、鑷子、膠頭、涂抹棒、托盤盒等）使用完畢后，擺放整齊。

 

14、滅菌后的無菌間懸掛“已滅菌”標識，正在使用的無菌間要懸掛“使用中”標識。防止檢測人員在未經過滅菌的無菌間中進行微生物檢測。

 

其它注意事項：

1.  禁止在無菌間內打手機，由于業務需要可在緩沖間內打手機。

 

2.  實驗過程中穿著整齊，不要出現露頭發、鼻孔等現象，禁止在無菌間打鬧、喧嘩。

 

3.  實驗過程中，物品要擺放整齊，實驗產生的垃圾要單獨存放不要亂放，防止污染實驗樣品。

 

4.  紫外燈每周五打掃衛生時要用酒精棉球擦拭，防止灰塵阻擋影響殺菌效果。

 

1.2實驗器具

實驗器具是微生物實驗的一個關鍵控制點，實驗器具的無菌是保證實驗結果準確的重要因素。

 

①培養皿，首先應確認是否經過消毒，確認后進行外觀檢查，觀察是否有破損，有破損處廢棄。滅過菌的平皿最多保存一周時間。打開的平皿整齊的擺放到實驗臺上備用，發現有破裂的平皿應廢棄；使用時看是否有平皿內部存有雜質、培養基等異物也應立即廢棄。

②玻璃器皿，新購置玻璃器具因含有游離堿，應在清潔液或2%鹽酸內浸泡24小時，再用蒸餾水清洗。檢驗沾染的油跡、污濁物等器具可用10%NaOH浸泡1小時后，用清水沖洗干凈。每周洗刷盛生理鹽水的三角瓶子，防止水垢太厚影響滅菌和微生物生長。

③實驗完畢后，使用的實驗器具應立即清洗消毒，防止微生物增長污染或者傷害到人員。所有衛生用具如拖把、掃帚、抹布、垃圾桶等都要根據污染區、清潔區、無菌區要求嚴格區分開、并專用，不得相互混淆，衛生用具每周定量用1：20次氯酸鈉液消毒浸泡、清洗、涼干，以免污染。

 

④在進行各種檢驗時，應避免污染；遇有場地、工作服等污染時，應立即處理，防止細菌擴散以免造成污染。凡吸過菌液的吸管或滴管或染菌的培養皿，應立即放入盛有消毒液的容器內或高壓滅菌處理。工作人員必須每天堅持做好環境衛生工作，防止灰塵飛揚，定期對整個操作環境進行消毒。

 

1.3藥品的使用

微生物藥品是微生物實驗的一個關鍵控制點，培養基質量的關系到檢測結果準確的重要因素。

 

①藥品的采購，實驗藥品缺少時，由藥品管理員上計劃。微生物藥品常規藥品按“箱”進行計算，不常用藥品按“瓶”進行計算，生化鑒定管按“支”進行計算，每種保留至少1個單位庫存量。

 

②藥品取用，藥品取用時到藥品管理員取鑰匙，取用后將藥品柜鎖死，并將鑰匙歸還給藥品管理員。取用人員發現藥品低于1個單位庫量時，及時通知藥品管理員。

 

③將近過期藥品（2個月），生化鑒定管可以退貨，其他藥品抓緊時間使用，過期藥品廢除。

 

④新藥品使用時，應注意檢查包裝是否有破損？粉末狀藥品是否有結塊？有無雜質？有無變色等異常。

 

⑤藥品稱量按照使用要求配制，并填寫藥品配制記錄。

 

⑥配制好的藥品按照滅菌要求進行，含糖的培養基滅菌總時間不超過45min，滅菌后觀察培養基的顏色、容量等，并搖勻培養基，放置瓊脂沉淀到底部。

 

⑦培養基使用前，按要求進行溶解，在溶解過程中要防止二次污染和溶解不充分；溶解后放到45~50度，放置備用時間不超過4h。

⑧使用時，進行冷卻溫度控制到45度左右，過高容易殺死微生物，過低培養基凝固。

 

⑨傾倒培養基時應注意無菌操作，并搖勻培養基。傾倒過多，培養基過厚需氧環境不好，過薄培養基容易干裂影響檢測結果，配制培養基盡可能按照樣品量進行配制，使用后的培養基根據情況廢棄或保存。

 

1.4滅菌鍋的使用

滅菌鍋屬于高壓滅菌容器，安全性和滅菌效果是控制的重點，使用規范如下：

安全事項：由于滅菌鍋屬高壓容器，壓力表要及時計量，操作過程中人員不得離開現場，如有異常問題及時通知相關人員，機修，管道。

 

①檢查高壓滅菌鍋的外觀是否正常，壓力表、溫度計是否歸零，各管路閥門是否為關閉狀態。

 

②排放物品，注意不要過滿；關鍋并將標示牌轉到已滅菌，調節閥打到排氣狀態。

 

③打開總閥門，打開排水法，進行管道排水，約1-2min當聽到無水聲時，關閉排水法。

 

④打開進氣閥和出氣閥，進行排氣，此過程是對鍋內空氣進行排氣，防止空氣存在影響滅菌效果。

 

⑤排氣等夾層壓力達到0.5Mpa，將調節閥調到滅菌狀態進行滅菌，培養基121℃15min；其他特殊培養基安滅菌要求進行滅菌。注意事項由于溫度為手控，所以滅菌過程中要注意溫度的變化。

 

⑥滅菌完畢后，填寫滅菌記錄，并關閉進氣閥，排氣閥不用關閉，并等溫度降低60度左右，壓力降到0；如果壓力過大時開鍋有可能打不開，另一個容易造成液體倒吸使瓶塞蹦出。

 

⑦開鍋后，及時將培養基取出搖勻后冷卻，物品取出后負責人要及時清鍋，防止其他物品污染滅菌物品。

 

⑧滅菌結束后，將排水閥打開，防止管道積水。

 

其他注意事項：

①溫度計無變化：1.溫度計損壞，2.電源未打開，3.探針堵塞，4.調節閥損壞不進氣。

 

②鍋門打不開：1.壓力過大，2.調節閥損壞，內部負壓。

 

③管道漏氣：找管道維修。

 

④滅菌鍋的每周清潔污物及凝結水同時清洗；滅菌鍋要保持干凈并無殘留物（尤其濾器）以防止生銹保證最大熱傳遞和橡膠用具以蒸沸15min滅菌為宜，高溫高壓處理易失去彈性。

 

⑤容積控制：采取稱中法測定蒸發量，體積100vml稀釋起重量為101vg，高壓夠體積偏差不超過1%。

 

1.5培養箱的使用

培養箱的溫度、濕度控制是微生物控制的關鍵點。使用規范如下：

①外觀檢查，有無噪音，是否放平穩，有無故障。

 

②檢查溫度設置是否為檢測要求溫度？顯示溫度與設定溫度是否在允許波動范圍內。

 

③為了保持培養箱內部濕度，可在培養箱內放一個盛水的小燒杯，防止培養基干燥。

 

④培養箱內物品擺放整齊，但不要過緊密，防止溫度，空氣等環境之間的差異對檢測結果的影響，并關好箱門（輕開輕關）。

 

⑤每天對培養箱內溫度計和顯示溫度進行比較，填寫儀器設備使用記錄，對較大差異的查找原因進行處理。

 

⑥保持好培養箱內衛生，對有異味的培養箱進行通氣，并每周對培養箱進行消毒殺菌,培養后的平皿及時清理，防止霉菌或其他微生物累積。

 

⑦冰箱每周進行除霜清理，存放的物品做好記錄，對不用的物品及時清理。

 

 

三、樣品接收

2.1送檢樣品的處理

微生物接受樣品，就是檢驗工作開始之時，樣品接收、交接環節是檢驗工作的第一環節，關系到檢驗工作質量和效率。

為了真實的反應車間加工產品的質量情況，正確的指導車間生產。具體措施如下：

化驗員到車間自取樣品，保證每個車間每周1個樣品，并在化驗結果后備注“自取”。另外有特殊情況可增加取樣量，微生物考核時按正常樣品計算，在自取樣品欄里填寫。

 

2.2樣品運輸

個人車間樣品由自己取，便于與車間交流溝通，掌握產品信息和工藝，對微生物檢測判斷有幫助。微生物樣品運輸過程中必須采用保溫袋，防止溫度變化；另外運輸過程中樣品不要落地，防止袋子破損污染樣品。

 

2.3樣品保存

冷凍品按要求進行解凍，干燥食品可放在常溫冷暗處，易腐和冷卻樣品應放入10℃環境。冷凍樣品來不及檢驗應放入-15℃以下冰箱內。

原則上冷凍樣品取出后，按包裝原樣在室溫下自然解凍；也可在0-4℃環境解凍，時間不超過18小時；也可在溫度不超過45℃環境中解凍，時間不超過15min。

 

2.4樣品制備

根據樣品不同性狀、類型的食品，進行適當處理，盡可能的保證均勻取樣。或按照檢測方法進行樣品處理。

 

 

四、日常工作

4.1文件資料及物品的規定

為了規范微生物資料管理，起到工作有秩序的目的，防止重要資料丟失。特對資料整理規定如下，希望大家嚴格執行，為我們創造一個良好的工作環境。

4.1.1個人桌面

1.原始記錄夾子要有對應車間的標簽，沒有的可向組長索要打印一張，不要出現標簽與內容不符的現象。

2.個人資料必須放到夾子里面，不要在桌面出現裝訂紙張。

3.原始記錄、抽取單不要隨意亂放，防止客戶參觀時隨意翻看，泄漏客戶機密，記錄完畢后，要整齊放到辦公室夾子座里面。

4. 其它資料包括書籍等要放到小柜里，借閱、歸還時要到資料管理員簽字，借閱的書籍也不要亂放，看完后要整齊放在辦公室桌子，禁止放到實驗區（可在實驗區閱讀）。

5. 有單頁報告單或者其他資料時，可放到插頁夾子里，每組一個，桌面不要出現單頁紙。

 

4.2電子文檔

1.電腦不允許下載歌曲游戲等。

2. 建立的新表格無用處時立即刪除。

3.提供客戶報表要存到相應的文件夾，防止文件丟失，并對提供文件標黃底

4. 不可隨意改動報表，尤其是匯總結果時禁止在車間報表上直接改動。

5.  每月結束后，設備管理員負責進行數據拷貝留存。