1.牛肉膏蛋白胨培養基(用于細菌培養)牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl 5g,水1000mL,pH7.4~7.6。
2.高氏1號培養基(用于放線菌培養)
可溶性淀粉20g,KNO31g,NaCl 0.5g,K2HPO4•3H2O 0.5g,MgSO4•7H2O0.5g,FeSO4•7H2O0.01g,水1000mL,pH7.4~7.6。配制時注意:可溶性淀粉要先用冷水調勻后再加入到以上培養基中。
3.馬丁氏(Martin)培養基(用于從土壤中分離真菌)
K2HPO41g,MgSO4•7H2O0.5g,蛋白胨5g,葡萄糖10g,1/3000孟加拉紅水溶液100mL,水900mL,自然pH,121℃濕熱滅菌30min。待培養基融化后冷卻55~60℃時加入鏈霉素(鏈霉素含量為30μg/mL)。
4.馬鈴薯培養基(PDA)(用于霉菌或酵母菌培養)
馬鈴薯(去皮)200g,蔗糖(或葡萄糖)20g,水1000mL,配制方法如下:
將馬鈴署去皮,切成約2c㎡的小塊,放入1500mL的燒杯中煮沸30min,注意用玻棒攪拌以防糊底,然后用雙層紗布過濾,取其濾液加糖,再補足至1000mL,自然pH,霉菌用蔗糖,酵母菌用葡萄糖。
5.察氏培養基(蔗糖硝酸鈉培養基)(用于霉菌培養)
蔗糖30g,NaNO3 2g,K2HPO4 1g,MgSO4•7H2O0.5g,KCl 0.5g,FeSO4•7H2O0.1g,水1000mL,pH7.0~7.2。
6.Hayflik培養基(用于支原體培養)
牛心消化液(或浸出液)1000mL,蛋白胨10g,NaCl 5g,瓊脂15g,pH7.8~8.0,分裝每瓶70mL,121℃濕熱滅菌15min,待冷卻至80℃左右,每70mL中加入馬血清20mL,25%鮮酵母浸出液10mL,15醋酸鉈水溶液2.5mL,青霉素G鉀鹽水溶液(20萬單位以上)0.5mL,以上混合后傾注平板。
*注意:醋酸鉈是極毒的藥品,需特別注意安全操作。
7.麥氏(McCLary)培養基(醋酸鈉培養基)
葡萄糖0.1g, KCl 0.18g,酵母膏0.25g,醋酸鈉0.82g,瓊脂l.5g,蒸餾水l00mL。溶解后分裝試管,1l5℃濕熱滅菌15min。
8.葡萄糖蛋白胨水培養基(用于V.P.反應和甲基紅試驗)
蛋白胨0.5g,葡萄糖0.5g,K2HPO4 0.2g,水100mL,pH7.2,1l5℃濕熱滅菌20min。
9.蛋白胨水培養基(用于吲哚試驗)
蛋白胨10g,NaCl 5g,水1000mL,pH7.2~7.4,121℃濕熱滅菌20min。
10.糖發酵培養基(用于細菌糖發酵試驗)
蛋白胨0.2g,NaCl 0.5g,K2HPO4 0.02g,水100mL,溴麝香草酚藍(1%水溶液)0.3mL,糖類lg。分別稱取蛋白胨和NaCl溶于熱水中,調pH至7.4,再加入溴麝香草酚藍(先用少量95%乙醇溶解后,再加水配成1%水溶液),加入糖類,分裝試管,裝量4~5cm高,并倒放入一杜氏小管(管口向下,管內充滿培養液)。115℃濕熱滅菌20min。滅菌時注意適當延長煮沸時間,盡量把冷空氣排盡以使杜氏小管內不殘存氣泡。常用的糖類,如葡萄糖、蔗糖、甘露糖、麥芽糖、乳糖、半乳糖等(后兩種糖的用量常加大為1.5%)。
11.RCM培養基(強化梭菌培養基)、(用于厭氧菌培養)
酵母膏3g,牛肉膏l0g,蛋白胨10g,可溶性淀粉lg,葡萄糖5g, 半胱氨酸鹽酸鹽0.5g,NaCl 3g,NaAc 3g,水l000mL,pH8.5,刃天青3mg/L,l2l℃濕熱滅菌30min。
12.TYA培養基(用于厭氧菌培養)
葡萄糖40g,牛肉膏2g,酵母膏2g,胰蛋白胨(bacto-typetone)6g,醋酸銨3g,KH2PO4 0.5g,MgSO4•7H2O0.2g,FeSO4•7H2O0.01g,水1000mL, pH6.5,121℃濕熱滅菌30min。
13.玉米醪培養基(用于厭氧菌培養)
玉米粉65g,自來水1000mL,混勻,煮10min成糊狀,自然pH,121℃濕熱滅菌30min。
14.中性紅培養基(用于厭氧菌培養)
葡萄糖40g,胰蛋白胨6g,酵母膏2g,牛肉膏2g,醋酸銨3g,KH2PO4 5g,中性紅0.2g,MgSO4•7H2O0.2g,FeSO4•7H2O0.01g, 水1000mL,pH6.2,121℃濕熱滅菌30min。
15.CaCO3明膠麥芽汁培養基(用于厭氧菌培養)
麥芽汁(6波美)1000mL,水1000mL,CaCO310g,明膠10g,pH6.8,121℃濕熱滅菌30min。
16.BCG牛乳培養基(用于乳酸發酵)
(A)溶液:
脫脂乳粉100g,水500mL,加入1.6%溴甲酚綠(B.C.G)乙醇溶液1mL,80℃滅菌20min。
(B)溶液:
酵母膏10g,水500mL,瓊脂20g, pH6.8,121℃濕熱滅菌20min。以無菌操作趁熱將(A)、(B)溶液混合均勻后倒平板。
17.乳酸菌培養基(用于乳酸發酵)
牛肉膏5g,酵母膏5g,蛋白胨10g,葡萄糖10g,乳糖5g,NaCl 5g,水1000mL,pH6.8,121℃濕熱滅菌20min。
18.酒精發酵培養基(用于酒精發酵)
蔗糖10g,MgSO4•7H2O 0.5g,NH4NO30.5g,20%豆芽汁2mL,KH2PO40.5g,水100mL,自然pH。
19.柯索夫培養基(用于鉤端螺旋體培養)
優質蛋白胨0.4g, NaCl 0.7g,KCl 0.02g, NaHCO3 0.01g,CaCl 0.02g,KH2PO40.09g,NaH2PO40.48g,蒸餾水500mL,無菌兔血清40mL。
制法:
除兔血清外的其余各成分混合,加熱溶解,調pH至7.2,121℃濕熱滅菌20min,待冷卻后,加入無菌兔血清,制成8%血清溶液,然后分裝試管(5~10mL/管),56℃水浴滅活lh后備用。
20.豆芽汁培養基
黃豆芽500g,加水1000mL,煮沸lh,過濾后補足水分,121℃濕熱滅菌后存放備用,此即為50%的豆芽汁;
用于細菌培養:
10%豆芽汁200mL,葡萄糖(或蔗糖)50g,水800mL,pH7.2~7.4。
用于霉菌或酵母菌培養:
10%豆芽汁200mL,糖50g,水800mL,自然pH。霉菌用蔗糖,酵母菌用葡萄糖。
21.LB(Luria—Bertani)培養基(細菌培養,常在分子生物學中應用)
雙蒸餾水950mL,胰蛋白胨l0g,NaCl l0g,酵母提取物(bacto- yeast extract)5g,用lmol/L NaOH (約l mL) 調節pH值至7.0,加雙蒸餾水至總體積為1L,121℃濕熱滅菌30min。
含氨芐青霉素LB培養基:
待LB培養基滅菌后冷至50℃左右加入抗生素,至終濃度為80~100mg/L。
22.復紅亞硫酸鈉培養基(遠藤氏培養基)、(用于水體中大腸菌群測定)
蛋白胨10g,牛肉浸膏5g,酵母浸膏5g,瓊脂20g,乳糖10g,K2HPO40.5g,無水亞硫酸鈉5g,5%堿性復紅乙醇溶液20mL,蒸餾水1000mL。
制作過程:
先將蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏和瓊脂加入到900mL水中,加熱溶解,再加入K2PO4,溶解后補充水至l000mL,調pH至7.2~7.4。隨后加入乳糖,混勻溶解后,于115℃濕熱滅菌20min。再稱取亞硫酸鈉至一無菌空試管中,用少許無菌水使其溶解,在水浴中煮沸10min后,立即滴加于20mL 5%堿性復紅乙醇溶液中,直至深紅色轉變為淡粉紅色為止。將此混合液全部加入到上述已滅菌的并仍保持融化狀態的培養基中,混勻后立即倒平板,待凝固后存放冰箱備用,若顏色由淡紅變為深紅,則不能再用。
23.乳糖蛋白胨半固體培養基(用于水體中大腸菌群測定)
蛋白胨10g,牛肉浸膏5g,酵母膏5g,乳糖10g,瓊脂5g,蒸餾水1000mL,pH7.2~7.4,分裝試管(l0mL/管),115℃濕熱滅菌20min。
24.乳糖蛋白胨培養液(用于多管發酵法檢測水體中大腸菌群)
蛋白胨10g,牛肉膏3g,乳糖5g,NaCl 5g,蒸餾水l000mL,1.6%溴甲酚紫乙醇溶液lmL。調pH至7.2,分裝試管(l0mL/管),并放入倒置杜氏小管,l15℃濕熱滅菌20min。
25.三倍濃乳糖蛋白胨培養液(用于水體中大腸菌群測定)
將乳糖蛋白胨培養液中各營養成分以擴大3倍加入到l000mL水中,制法同上,分裝于放有倒置杜氏小管的試管中,每管5mL,1l5℃濕熱滅菌20min。
26.伊紅美藍培養基(EMB培養基)(用于水體中大腸菌群測定和細菌轉導)
蛋白胨l0g,乳糖10g,K2HPO4 2g,瓊脂25g,2%/伊紅Y(曙紅)水溶液20mL,0.5%美藍(亞甲藍)水溶液l3mL,pH7.4。
制作過程:
先將蛋白胨、乳糖、K2HPO4和瓊脂混勻,加熱溶解后,調pH至7.4,1l5℃濕熱滅菌20min,然后加入已分別滅菌的伊紅液和美藍液,充分混勻,防止產生氣泡。待培養基冷卻到50℃左右倒平皿。如培養基太熱會產生過多的凝集水,可在平板凝固后倒置存于冰箱備用。在細菌轉導實驗中用半乳糖代替乳糖,其余成分不變。
27.加倍肉湯培養基(用于細菌轉導)
牛肉膏6g,蛋白胨20g,NaCl 10g,水1000mL,pH7.4~7.6。
28.半固體素瓊脂(用于細菌轉導)瓊脂1g,水100mL,121℃濕熱滅菌30min。
29.豆餅斜面培養基(用于產蛋白酶霉菌菌株篩選)
豆餅100g加水5~6倍,煮出濾汁100mL,汁內加入KH2PO4 0.1%,MgSO4 0.05%,(NH4)2SO4 0.05%,可溶性淀粉2%,pH6,瓊脂2%~2.5%。
30.酪素培養基(用于蛋白酶菌株篩選)
分別配制A液和B液。
A液:稱取Na2HPO4•7H2O 1.07g。干酪素4g,加適量蒸餾水,并加熱溶解。
B液:稱取KH2PO4 0.36g,加水溶解。A、B液混合后,加入酪素水解液0.3 mL,加瓊脂20g,最后用蒸餾水定容至1000mL。
酪素水解液的配制:
1g酪蛋白溶于堿性緩沖液中,加入1%的枯草芽孢桿菌蛋白酶25mL加水至100mL,30℃水解l h。用于配制培養基時,其用量為1000mL,培養基中加入100mL以上水解液。
31.細菌基本培養基(用于篩選營養缺陷型)
Na2HPO4•7H2O 1g,MgSO4•7H2O0.2g,葡萄糖5g,NaCl 5g,K2HPO4lg,水l000mL,pH7.0,115℃濕熱滅菌30min。
32.YEPD培養基(用于酵母原生質體融合)
酵母粉10g,蛋白胨20g,葡萄糖20g,蒸餾水1000mL,pH6.0,115℃濕熱滅菌20min。
33.YEPD高滲培養基(用于酵母原生質體融合)
在YEPD培養基中加入0.6mol/L的NaCL,3%瓊脂。
34.YNB基本培養基(用于酵母原生質體融合)
0.67%酵母氮堿基(YNB, 不含氨基酸,Difco),2%葡萄糖,3%瓊脂,pH6.2。
另一配方為:
葡萄糖10g(NH4)2SO4 1g,K2HPO40.125g,KHPO4 0.875g,KI 0.0001g,MgSO4•7H2O0.5g,CaCl2•2H2O0.lg,NaCl0.1g,維量元素母液lmL,維生素母液lmL(母液均按常規配制),水1000mL,pH5.8~6.0。
35.YNB高滲基本培養基(用于原生質體融合)
在YNB基本培養基中加入0.6mol/LNaCl。
36.酚紅半固體柱狀培養基(用于檢查氧與菌生長的關系)
蛋白胨1g,葡萄糖10g, 玉米漿10g,瓊脂7g,水1000mL,pH7.2。在調好pH后,加入1.6%酚紅溶液數滴,至培養基變為深紅色,分裝于大試管中,裝量約為試管高度的1/2,1l5℃滅菌20min。細菌在此培養基中利用葡萄糖生長產酸,使酚紅從紅色變成黃色,在不同部位生長的細菌,可使培養基的相應部位顏色改變,但注意培養時間太長,酸可擴散以致不能正確判斷結果。
以上各種培養基均可配制成固體或半固體狀態,只需改變瓊脂用量即可,前者為1.5%~2.0%,后者為0.3%~0.8%。
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