第一法 大腸菌群MPN法

1、取樣原則：本標準中對應的檢樣量分別為0.1g（mL）、0.01g（mL）、0.001g（mL），根據樣品限量值，查閱附錄部分MPN表：

（1）無論固體或液體，當限量值為“＜3.0”或其它任意能在標準“表1”中查到的數值，則分別取1mL 1：10的樣品勻液接種到3管單料LST肉湯管、分別取1mL 1：100的樣品勻液接種到3管單料LST肉湯管、分別取1mL 1：1000的樣品勻液接種到3管單料LST肉湯管；

（2）無論固體或液體樣品的限量值為“＜0.3”或其它任意為MPN表中查到的數值縮小10倍的數值，則分別取10mL樣品1:10稀釋液接種到3管雙料LST肉湯管、分別取1mL 1：10的樣品勻液接種到3管單料LST肉湯管、分別取1mL 1：100的樣品勻液接種到3管單料LST肉湯管（如蜂蜜的限量值為0.3MPN/g，即采取此做法）。

2、凡產酸或產氣的LST管，都取1環接種GBLB肉湯管，凡BGLG產氣者記為陽性。

第二法 大腸菌群平板計數法

（常見問題匯總）

1、VRBA培養相關問題
（1）所用器皿是否需要滅菌？
答：不需要。配制培養基所用到的錐形瓶、玻璃棒、勺子等均不需要滅菌，但要求一定要清洗干凈，表面無污漬、無殘留。煮沸完成后，取下錐形瓶，用一般常用的衛生紙（軟紙）覆蓋瓶口，用橡皮筋纏繞，待冷卻至適宜溫度即可傾注培養基。在傾注培養基時，須點燃酒精燈，稍微灼燒錐形瓶口。

（2）如何保持“煮沸2min”？
答：可以用電磁爐或電熱板進行加熱煮沸，在該培養基即將煮沸時調低溫度。實際操作時，不需要嚴格按照此要求進行，加熱煮沸數秒即可。原因：本培養基很難保持煮沸2min，一旦煮沸，則培養基很快上涌、翻騰，若不調低溫度或立刻采取其他措施，則培養基可在數秒內噴涌出來，嚴重者可噴涌2米以上、電磁爐周圍1—2米范圍內都是培養基飛濺的范圍（實驗室危險因子之一）。

（3）若培養基未用完，是否可以冷藏起來下次用？
答：不可以。4789.28中已規定，固體培養基最多允許熔融1次（指的是經過高壓滅菌冷卻后的培養基還可以熔融一次后使用）。且VRBA培養基冷卻后，再次熔融時非常容易噴涌，若溫度控制不當，底部培養基熔融后很快就會發生噴涌（即培養基未完全熔融就會發生噴涌現象）。

（4）傾注完成后是否需要“覆蓋一層”？如何覆蓋？
答：一般情況下不需要覆蓋。在實際操作過程中，若檢驗員初次接觸該食品（或食品品類），則有必要在傾注培養基后再覆蓋一層（原因是不清楚該樣品是否會發生蔓延）。而如此往復測試幾次后，若該樣品或食品品類均不存在蔓延現象，則以后的實驗中都不需要進行覆蓋。若重復多次測試后都有蔓延現象，則以后的檢驗中最好都進行覆蓋，最好是在原培養基已凝固或半凝固（不會發生晃動）時再傾注一層培養基（“一層”是指緩慢傾注培養基至培養基剛好能夠覆蓋整個平皿）。

2、如何確定培養基上長的是不是大腸菌群？
答：建議新手們認真按照標準進行證實試驗，此證實試驗簡單易操作，每一次VRBA上有菌落生長都進行證實試驗，如此往復3-4次，對于哪種形態才是大腸菌群已經能夠了然于心。

第二部分、GB/T 4789.3-2003 《大腸菌群測定》——標準解讀

（標準補充）

1、由于MPN表中給出的檢樣量為1mL（g）、0.1mL（g）0.01mL（g）三個稀釋度，所以：

（1）無論固體或液體，當限量值為“＜30”或其它任意能在標準“表1”中查到的數值，則分別取10mL 1：10的樣品勻液接種到3管雙料乳糖膽鹽發酵管、分別取1mL 1：10的樣品勻液接種到3管單料乳糖膽鹽發酵管、分別取1mL 1：100的樣品勻液接種到3管單料乳糖膽鹽發酵管（有時限量值≤300，也建議同樣操作）；

（2）若液體樣品的限量值為“＜3”，則分別取10mL樣品原液接種到3管雙料乳糖膽鹽發酵管、分別取1mL樣品原液接種到3管單料乳糖膽鹽發酵管、分別取1mL 1：10的樣品勻液接種到3管單料乳糖膽鹽發酵管，9管皆為陰性則符合該限量值。

2、大腸菌群在EMB培養基上的典型形態特征，參考GB 5750-2006中總大腸菌群發酵法相關章節。但仍然建議：一旦有菌落數生長，無論是否為典型形態，都應挑取進行革蘭氏染色及證實試驗。

3、最后一次證實試驗，凡乳糖發酵管產氣（無論氣泡大小）且革蘭氏染色鏡檢為陰性則判定為大腸菌群陽性。

以GB 2726-2016《食品安全國家標準 熟肉制品》為例，其中大腸菌群指標如下：

該標準提到的檢驗方法并未寫明是按GB 4789.3-2016中的第一法還是第二法檢測，那現在按檢測標準來分析一下：

1. GB/T 4789.3-2003的檢測結果單位為MPN/100克或MPN/100毫升”

2. GB 4789.3-2016中的第一法中的檢測單位為“MPN/克或MPN/毫升”

3. GB 4789.3-2016中的第二法檢測結果單位為“CFU/克或CFU/毫升”