開 篇
我們經常看見這樣的報道,某某飲用水廠商的一批飲用水中被查出銅綠假單胞菌超標,飲用水呈綠色,網友們紛紛調侃,水都不能喝了,該怎么生存?那么銅綠假單胞菌到底是什么?它是如何進入到飲用水中的?我們該如何預防這種細菌的侵害?
銅綠假單胞菌
P.Aeruginosa
一種重要的水源性致病菌,廣泛存在于各類型水中,對消毒劑、干燥、紫外線等理化因素及不良環境具有很強的抵抗力;作為條件致病菌,可能引起急性腸道炎、腦膜炎、敗血癥和皮膚炎癥等疾病。因此,監測分析其污染原因并進行有效控制顯得尤為重要。
1
銅綠假單胞菌如何進入飲用水中的?
瓶(桶)裝水中銅綠假單胞菌的污染主要原因有水源受到污染,或現有的較為簡單的水生產加工工藝;或生產過程中衛生控制不嚴格,從業人員未經消毒的手直接與礦泉水或容器內壁接觸;或包裝材料未進行徹底清洗消毒。
2
檢驗
檢查食品(飲用水)中的銅綠假單胞菌成為食品抽檢必不可少的檢測項目,以檢測飲用水為例列舉銅綠假單胞菌的檢測方法(GB 8538-2016 食品安全國家標準 飲用天然礦泉水檢驗方法):
1.水樣過濾
在100級的潔凈工作臺進行過濾操作。首先用無菌鑷子夾取滅菌濾膜邊緣部分,將粗糙面向上,貼放在已滅菌的濾床上,固定好濾器,將250mL水樣或稀釋液通過孔徑0.45μm的濾膜過濾,然后將過濾后的濾膜貼在已制備好的CN瓊脂平板上,平鋪并避免在濾膜和培養基之間夾留著氣泡。
2.培養
將平板倒置于36℃士1 C培養24 h~48 h,并防止干燥。
3.結果觀察
在培養20 h~24 h和40 h~48 h后觀察濾膜上菌落的生長情況并計數。
計數所有顯藍色或綠色(綠膿色素)疑似銅綠假單胞菌的菌落,并進行綠膿菌素確證性試驗。
在紫外線下檢查濾膜時,應避免長時間在紫外光下照射,否則可能會將平板上的菌落殺滅,而導致無法在證實培養基上生長。計數濾膜上所有發熒光不產綠膿色素疑似銅綠假單胞菌菌落,并進行乙酰胺肉湯確證性試驗。
將其他所有紅褐色不發熒光的菌落進行氧化酶測試、乙酰胺液體培養基、金氏B培養基確證性試驗,培養20 h~24 h觀察結果,防止因為培養40 h~48 h導致菌落過分生長而出現菌落融合。
在CN瓊脂上生長的菌落選擇和驗證步驟見表31。
1、若CN板上是藍綠色(如下圖)疑似銅綠假單胞菌的菌落,需進行綠膿菌素確證性試驗
綠膿菌素試驗:取可疑菌落2個~3個,分別接種在綠膿菌素測定培養基上,置36℃±1℃培養24h±2h,加入三氯甲烷3mL~5mL,充分振蕩使培養物中的綠膿菌素溶解于三氯甲烷液內,待三氯甲烷提取液呈藍色時,用吸管將三氯甲烷移到另一試管中并加入1mol/L的鹽酸1mL左右,振蕩后,靜置片刻。如上層鹽酸液內出現粉紅色到紫紅色時為陽性,表示被檢物中有綠膿菌素存在。
1.1綠膿菌素測定培養基中加入三氯甲烷后的顏色(如下圖)
1.2用吸管將三氯甲烷移到另一試管內加入鹽酸,振蕩,靜置(如下圖)
1.3藍色菌落呈粉紅色,綠色菌落呈淡粉色,有綠膿菌素存在。
2、若CN板上有熒光(如下圖)
按照GB85538-2016標準,產熒光(非藍綠)要進行產氨實驗。
2.1將產熒光的菌落的純培養物接種到乙酰胺肉湯中36℃培養24h,加入鈉氏試劑(如下圖)。
3、若CN板上是紅褐色
按照GB85538-2016標準,紅褐色菌落要進行產氨試驗、氧化酶試驗。金氏B產熒光試驗。
鑒于本人經驗有限,接觸樣品不多,買的標準菌株也是綠色形態(前面那株藍色菌落也是樣品中發現的,甚是寶貴)。所以,至今未見過紅褐色菌落,若有同行有檢出或者見過,還望交流,多加學習。
3.1標準菌株形態(如下圖)
3.2產氨實驗(同上,略)
3.3氧化酶試驗(如下圖)
3.4金氏B產熒光試驗(如下圖)
4、其他
其他非前面三種,則判斷不是銅綠假單胞菌。