將制備的1:10樣品勻液于36℃±1℃培養8 h~18 h

用無菌吸管吸取1:10樣品勻液1 mL，注入含有9 mL 3%氯化鈉堿性蛋白胨水的試管內，振搖 試管混勻，制備1:100的樣品勻液。

另取1 mL無菌吸管，按5.2.2.1操作程序，依次制備10倍系列稀釋樣品勻液，每遞增稀釋一次，換用一支1 mL無菌吸管。

根據對檢樣污染情況的估計，選擇3個適宜的連續稀釋度，每個稀釋度接種3支含有9 mL 3% 氯化鈉堿性蛋白胨水的試管，每管接種1 mL置36℃±1℃恒溫箱內，培養8 h〜18 h

對所有顯示生長的增菌液，用接種環在距離液面以下1 cm內沾取一環增菌液，于TCBS平板或 弧菌顯色培養基平板上劃線分離。一支試管劃線一塊平板。于36±1℃培養18 h〜24 h

典型的副溶血性弧菌在TCBS上呈圓形、半透明、表面光滑的綠色菌落，用接種環輕觸，有類似 口香糖的質感，直徑2 mm〜3 mm。從培養箱取出TCBS平板后，應盡快（不超過1 h)挑取菌落或標記 要挑取的菌落。典型的副溶血性弧菌在弧菌顯色培養基上的特征按照產品說明進行判定。

挑取3個或以上可疑菌落，劃線接種3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板，36℃±1℃培養18 h〜24h

氧化酶試驗：挑選純培養的單個菌落進行氧化酶試驗，副溶血性弧菌為氧化酶陽性。

涂片鏡檢：將可疑菌落涂片，進行革蘭氏染色，鏡檢觀察形態。副溶血性弧菌為革蘭氏陰性，呈

棒狀、弧狀、卵圓狀等多形態，無芽胞，有鞭毛。

挑取純培養的單個可疑菌落，轉種3%氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面并穿刺底層，36℃±1℃培養24 h 觀察結果。副溶血性弧菌在3%氯化鈉三糖鐵瓊脂中的反應為底層變黃不變黑，無氣泡，斜面顏色不變 或紅色加深，有動力。

嗜鹽性試驗：挑取純培養的單個可疑菌落，分別接種0%、6%、8%和10%不同氯化鈉濃度的胰 胨水，36℃±1℃培養24 h，觀察液體混濁情況。副溶血性弧菌在無氯化鈉和10%氯化鈉的胰胨水中不 生長或微弱生長，在6%氯化鈉和8%氯化鈉的胰胨水中生長旺盛。

取純培養物分別接種含3%氯化鈉的甘露醇試驗培養基、賴氨酸脫羧酶試驗培養基、MR-VP培養基， 36℃±1℃培養24 h~48 h后觀察結果；3%氯化鈉三糖鐵瓊脂隔夜培養物進行ONPG試驗可選擇生化 鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統。