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    氨基酸的分離鑒定

    放大字體  縮小字體 發布日期:2013-08-29  來源:實驗室資訊網
    核心提示:一、目的通過氨基酸的分離,學習紙層析法的基本原理及操作方法。二、原理紙層析法是用濾紙作為惰性支持物的分配層析法。層析溶劑
     一、目的
    通過氨基酸的分離,學習紙層析法的基本原理及操作方法。
    二、原理
    紙層析法是用濾紙作為惰性支持物的分配層析法。
    層析溶劑由有機溶劑和水組成。
    物質被分離后在紙層析圖譜上的位置是用Rf 值(比移)來表示的:
    R=原點到層析點中心的距離
    原點到溶劑前沿的距離
    在一定的條件下某種物質的Rf 值是常數。Rf 值的大小與物質的結構、性質、溶劑系統、層析濾紙的質量和層析溫度等因素有關。本實驗利用紙層析法分離氨基酸。
    三、器材
    1、層析缸① 2、毛細管3、噴霧器4、培養皿
    5、層析濾紙(新華一號)
    四、試劑 
    1、擴展劑
    是4 份水飽和的正丁醇和1 份醋酸的混合物。將20mL 正丁醇和5mL 冰醋酸放入分液漏斗中,與15mL 水混合,充分振蕩,靜置后分層,放出下層水層。取漏斗內的擴展劑約5mL 置于小燒杯中做平衡溶劑,其余的倒入培養皿中備用.
    2、氨基酸溶液0.5%的賴氨酸、脯氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它們的混合液(各組份濃度均為0.5%)。各5mL
    3、顯色劑50~100mL
    0.1%水合茚三銅正丁醇容液。
    五、操作
    1、將盛有平衡溶劑的小燒杯置于密閉的層析缸中。
    2、取層析濾紙(長22cm、寬14cm)一張。在紙的一端距邊緣2~3cm處用鉛筆劃一條直線,在此直線上第間隔2cm 作一記號如右圖。
    3、點樣用毛細管將各種氨基酸樣品分別點在這6 個位置上,干后再點一次。每點在紙上擴散的直徑最大不超過3mm。
    4、擴展用線將濾紙縫成筒狀,紙的兩邊不能接觸。將盛有約20mL擴展劑的培養皿建迅速置于密閉的層析缸中,并將濾紙直立于培養皿中(點樣的一端在下,擴展劑的液面需你于點樣線1cm)。待溶劑上升15~20cm 時即取出濾紙,自然干燥或用吹風機熱風吹干。
    5、顯色用噴霧器均勻噴上0.1%茚三酮正丁醇溶液,然后置烘箱中烘烤5 分鐘(100℃)或用熱風吹干即可顯出各層析斑點。
    6、計算各種氨基酸的Rf 值。
    編輯:songjiajie2010

     
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    關鍵詞: 氨基酸 分離鑒定
     

     
     
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