測定食物中脂肪的方法有兩種:索泰(HT)抽提法和羅高氏法
一、索泰(HT)抽提法
索氏抽提法提取一個樣品的時間取決于樣品的種類,一般需要6-12小時,需較大的人力、物力和時間。而索泰抽提法可用不同沸點的多種溶劑,提取一個樣品只需30-60分鐘,此法快速、簡便、準確、節約溶劑,并且安全省力。
1.原理
原理與索氏提取法相同,即在已烘至恒重的一定量的干樣品中加入有機溶劑,在一定的溫度下加熱,使樣品中的脂肪溶于有機溶劑中,然后將溶劑蒸干,稱殘留物的重量,即為干樣品中的粗脂肪(包括磷脂、固醇、游離脂肪酸等脂溶性物質)含量。
2.適用范圍
此方法適用于測定食物、飼料、土壤、橡膠、藥物以及其他物質中的脂肪。
3.儀器
(1)瑞士Tecator公司設計生產的索泰(HT)(SoxtecHT)系統
(2)分析天平
(3)感量0.0001g
(4) 恒溫干燥箱
4.試劑
根據不同的樣品,選擇不同的有機溶劑(分析純)。例如:測定食物樣品用無水乙醚。其它的有機溶劑是:氯仿、石油醚等。
5.操作步驟
5.1提取:將已稱重的干燥樣品放入濾紙套中,一并置入提取套管內。在已稱重的提取杯中加入占容積約1/3(約為25-50ml)的有機溶劑,將杯與提取套管密切相連,使不漏氣,然后將調節鈕放在垂直位置,將控制鈕放到沸騰位。根據溶劑種類不同,調節加熱溫度,使溶劑沸騰。反復蒸餾提取,一般需30-60分鐘。若用無水乙醚為提取溶劑,加熱到80℃,蒸餾20-30分鐘即可。
5.2淋洗:蒸餾提取完畢,將控制鈕移至淋洗位上,使已冷卻的溶劑淋洗出樣品中最后殘留的微量脂溶物,約淋洗30-40分鐘。
5.3回收溶劑:將調節鈕放到水平位置,溶劑蒸發桿板到蒸發位置上,提取杯中的殘留溶劑即全部蒸發。
5.4稱重:取下提取杯,在100℃烘箱內烘半小時,放入干燥器內冷卻至室溫,稱重。
6.計算結果
脂肪(g)/100g干樣=(W3-W2)/W1
式中
W1=樣品重量(g)
W2=提取杯重量(g)
W3=提取杯+樣品脂肪重(g)
7.注意事項
7.1同一實驗室同時或連續兩次測定結果之差不得超過平均值的10%。
7.2儀器應放在通風柜內。
二、羅高氏法?
此方法是測定乳類樣品中脂肪含量的基準方法。
1.原理?
乙醚不能從牛乳及其它液體食品中直接抽提脂肪。需先用堿處理,使酪蛋白鈣鹽溶解,并降低其吸附力,才能使脂肪球與乙醚混合。加入乙醇,可使乙醇溶解物溶于其中,加入石油醚可使乙醚不與水相混溶,而使分層清晰。將醚層與水相分離,將醚層蒸發后,即得脂肪含量。?
2.適用范圍
此法適用于測定乳類及乳制品類,如鮮奶、奶粉、酸奶、冰淇淋、奶油等食物中脂肪含量。
3.儀器
(1)分液漏斗?
(2)恒溫烘箱?
(3)脂肪杯?
4.試劑?
所有試劑,如未注明規格,均指分析純;所有實驗用水,均指蒸餾水。?
(1)氫氧化銨(氨水)?
(2)95%乙醇?
(3)乙醚?
(4)石油醚?
(5)無水硫酸鈉?
5.操作步驟?
取20ml鮮乳稱重,(如取奶粉樣品時,需先準確稱取一定量的奶粉后,以1:8的比例加蒸餾水調勻)置于150ml分液漏斗內,加2.5ml氨水,混勻。加入20ml 95%乙醇,混勻。?在上述乳混合液中加入30ml乙醚,猛烈振搖1分鐘,再加入30ml石油醚,同樣振搖1分鐘,靜置分層。
* 第二次用醚液重復提取殘液時,不要猛烈振搖,以防乳化。
6.結果計算
7.注意事項
同一實驗室同時或連續兩次測定結果之差不得超過10%。
一、索泰(HT)抽提法
索氏抽提法提取一個樣品的時間取決于樣品的種類,一般需要6-12小時,需較大的人力、物力和時間。而索泰抽提法可用不同沸點的多種溶劑,提取一個樣品只需30-60分鐘,此法快速、簡便、準確、節約溶劑,并且安全省力。
1.原理
原理與索氏提取法相同,即在已烘至恒重的一定量的干樣品中加入有機溶劑,在一定的溫度下加熱,使樣品中的脂肪溶于有機溶劑中,然后將溶劑蒸干,稱殘留物的重量,即為干樣品中的粗脂肪(包括磷脂、固醇、游離脂肪酸等脂溶性物質)含量。
2.適用范圍
此方法適用于測定食物、飼料、土壤、橡膠、藥物以及其他物質中的脂肪。
3.儀器
(1)瑞士Tecator公司設計生產的索泰(HT)(SoxtecHT)系統
(2)分析天平
(3)感量0.0001g
(4) 恒溫干燥箱
4.試劑
根據不同的樣品,選擇不同的有機溶劑(分析純)。例如:測定食物樣品用無水乙醚。其它的有機溶劑是:氯仿、石油醚等。
5.操作步驟
5.1提取:將已稱重的干燥樣品放入濾紙套中,一并置入提取套管內。在已稱重的提取杯中加入占容積約1/3(約為25-50ml)的有機溶劑,將杯與提取套管密切相連,使不漏氣,然后將調節鈕放在垂直位置,將控制鈕放到沸騰位。根據溶劑種類不同,調節加熱溫度,使溶劑沸騰。反復蒸餾提取,一般需30-60分鐘。若用無水乙醚為提取溶劑,加熱到80℃,蒸餾20-30分鐘即可。
5.2淋洗:蒸餾提取完畢,將控制鈕移至淋洗位上,使已冷卻的溶劑淋洗出樣品中最后殘留的微量脂溶物,約淋洗30-40分鐘。
5.3回收溶劑:將調節鈕放到水平位置,溶劑蒸發桿板到蒸發位置上,提取杯中的殘留溶劑即全部蒸發。
5.4稱重:取下提取杯,在100℃烘箱內烘半小時,放入干燥器內冷卻至室溫,稱重。
6.計算結果
脂肪(g)/100g干樣=(W3-W2)/W1
式中
W1=樣品重量(g)
W2=提取杯重量(g)
W3=提取杯+樣品脂肪重(g)
7.注意事項
7.1同一實驗室同時或連續兩次測定結果之差不得超過平均值的10%。
7.2儀器應放在通風柜內。
二、羅高氏法?
此方法是測定乳類樣品中脂肪含量的基準方法。
1.原理?
乙醚不能從牛乳及其它液體食品中直接抽提脂肪。需先用堿處理,使酪蛋白鈣鹽溶解,并降低其吸附力,才能使脂肪球與乙醚混合。加入乙醇,可使乙醇溶解物溶于其中,加入石油醚可使乙醚不與水相混溶,而使分層清晰。將醚層與水相分離,將醚層蒸發后,即得脂肪含量。?
2.適用范圍
此法適用于測定乳類及乳制品類,如鮮奶、奶粉、酸奶、冰淇淋、奶油等食物中脂肪含量。
3.儀器
(1)分液漏斗?
(2)恒溫烘箱?
(3)脂肪杯?
4.試劑?
所有試劑,如未注明規格,均指分析純;所有實驗用水,均指蒸餾水。?
(1)氫氧化銨(氨水)?
(2)95%乙醇?
(3)乙醚?
(4)石油醚?
(5)無水硫酸鈉?
5.操作步驟?
取20ml鮮乳稱重,(如取奶粉樣品時,需先準確稱取一定量的奶粉后,以1:8的比例加蒸餾水調勻)置于150ml分液漏斗內,加2.5ml氨水,混勻。加入20ml 95%乙醇,混勻。?在上述乳混合液中加入30ml乙醚,猛烈振搖1分鐘,再加入30ml石油醚,同樣振搖1分鐘,靜置分層。
分層后,將下層殘液放入另一容器內,將上層乙醚液通過無水硫酸鈉過濾入己恒重的脂肪杯內。再用10ml乙醚和10ml石油醚重復提取殘液一次,仍通過無水硫酸鈉過濾入原有的醚提取液杯內。最后用少量潔凈的無水乙醚淋洗無水硫酸鈉。將上述的醚提取液放在索泰氏抽提器從40-80℃緩緩加熱,蒸餾出醚液后,取下杯,在100℃烘箱內烘半小時,放入干燥器內冷卻至室溫,稱重。?
* 第二次用醚液重復提取殘液時,不要猛烈振搖,以防乳化。
6.結果計算
?
計算公式:
鮮乳脂肪(g)/100g鮮乳=(W3-W2)/W1×100?
式中
計算公式:
鮮乳脂肪(g)/100g鮮乳=(W3-W2)/W1×100?
式中
W1=鮮乳重量(g)?
W2=脂肪杯重量(g)?
W3=鮮乳脂肪+脂肪杯重量(g)?
W2=脂肪杯重量(g)?
W3=鮮乳脂肪+脂肪杯重量(g)?
7.注意事項
同一實驗室同時或連續兩次測定結果之差不得超過10%。