通常，高壓蒸汽滅菌溫度是一個固定值，如，試管斜面培養基和搖瓶液體培養基的滅菌要求為：121℃，20min，但在121℃只是滅菌溫度的下限，實際的滅菌溫度在121℃～124℃（或123℃）之間波動。

如果是自動控溫型滅菌鍋，設定好滅菌溫度下限為121℃后，當溫度升到124℃（或123℃）時，自動斷電停止加熱，當溫度降到121℃時，自動開始加熱；如果是手動控溫型滅菌鍋，當溫度升到124℃時，手動切斷電源停止加熱，當溫度降到121℃時，手動接通電源開始加熱。

1）非自動控溫型滅菌鍋多為小型滅菌鍋

對于這類滅菌鍋必須排凈冷空氣，如果不排凈冷空氣，冷空氣熱膨脹后對壓力鍋的工作壓力有所貢獻，此時壓力和溫度不能一一對應，顯示的溫度比鍋內的實際工作溫度高，滅菌鍋的工作溫度不能達到設定的殺菌溫度，會影響滅菌效果。

2）自動控溫型滅菌鍋

自動控溫型滅菌鍋通過熱敏電極監測鍋內溫度變化，顯示屏上顯示的溫度是鍋內真實的工作溫度，在冷空氣沒有排凈的情況下，也能夠保證滅菌的溫度要求。由于飽和水蒸汽的滅菌效果最好，所以在使用自動控溫型滅菌鍋時，也應該排放冷空氣，提高滅菌效果，鍋下通常設有排水排氣閥，滅菌時可將排水閥向左（向右為排水）旋轉少許，讓少量蒸汽排出，也有的滅菌設備上設有可調排氣閥，滅菌時，始終保持排氣閥處于微開狀態，可起到排出冷空氣的作用。

1）非自動控溫型滅菌鍋：

①手動打開安全閥，看安全閥是否正常；

②加熱升溫過程中，看壓力表指針的上升狀況是否有受阻情況發生，沒有受阻，可正常使用。

2）自動控溫型滅菌鍋的簡易安全檢查：

①手動打開安全閥，看安全閥是否正常；

②加水時，觀察水位指示燈是否正常顯示水位狀況；

③在排除冷空氣的前提下， 觀察顯示屏上的溫度和壓力表指示溫度的差，通常情況下，壓力表上的溫度略高于顯示屏上的溫度，此壓力差如果不超過3℃，可正常使用。

（1）水：水溫過高可能會導致預定的真空水平改變，水溫應盡量低。滅菌鍋使用的水應符合應用水質量，并且溫度不超過15℃。水的硬度值在0.7～2.0mmoL /L之間。超出該范圍的硬度值可能會引起水垢和腐蝕等問題。從而縮短滅菌鍋的使用壽命，使用的水需經過過濾和處理，應保持鍋體清潔。

（2）蒸汽的干燥程度滅菌鍋應使用干燥程度不小于0.9的飽和蒸汽，即蒸汽含水量不超過10%，金屬負載狀態下，干燥程度不小于0.95，以保持溫度與壓力符合線性關系。

（3）滅菌時間滅菌時間是指滅菌過程中滅菌室內達到規定溫度后滅菌所需時間。

操作中，應注意觀察蒸汽的進汽速度和壓力, 一般保持壓力和溫度同步上升。

實際工作中常需要對液體滅菌，高壓滅菌鍋說明書中，表明能夠對瓶狀的液體進行滅菌處理，但在實驗中卻遇到了意外的情況：用敞口的玻璃瓶滅菌，其結果是玻璃瓶中的液體減少了1/3；用塑料薄膜緊緊封住瓶口，封口塑料薄膜中間破裂，玻璃瓶中的液體仍減少1/3。在對液態物質進行滅菌時，當滅菌結束注意卸壓不能過快，盡量將排氣閥關小，保持自然降壓，保持系統原有的平衡，以防產生液體減少或噴濺現象。